
簡要描述:PolyamineRED是一種與多胺特異性反應,并向多胺添加紅色熒光色素TAMRA的試劑。不與單胺或氨基酸反應。由于本產品可用于活細胞,因此能夠簡單地檢測出細胞內多胺并進行半定量。
產品型號
廠商性質
更新時間
瀏覽次數
技術文章
| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一個月 |
|---|
用于檢測細胞內多胺的熒光試劑PolyamineRED
PolyamineRED是一種與多胺特異性反應,并向多胺添加紅色熒光色素TAMRA的試劑。不與單胺或氨基酸反應。由于本產品可用于活細胞,因此能夠簡單地檢測出細胞內多胺并進行半定量。
※本產品基于國立研究開發法人 理化學研究所 開拓研究本部 田中生體機能合成化學研究室的研究成果商品化。
※本產品僅供科研使用。不可應用于臨床。

PolyamineRED擁有細胞膜透過性,在細胞內與多胺發生反應并將TAMRA偶聯至多胺。由于TAMRA與多胺結合后會失去膜透過性,所以可以通過清洗去除未反應的PolyamineRED,因此可選擇性實現細胞內多胺的可視化。已知多胺會在癌細胞中過量產生,所以使用PolyamineRED可以檢測出癌細胞中重要的多胺信號。詳情請參考應用實例。
◆多胺是什么
多胺是含有兩個或以上氨基的直鏈烷基胺的總稱。已從生物體中鑒定出各種結構的多胺,主要為腐胺(putrescine),亞精胺(Spermidine)和精胺(Spermine)。以亞mM~mM的高濃度存在于哺乳動物、微生物、植物的細胞中。
據報導,它在生理pH下顯示聚陽離子性,并通過與DNA / RNA和蛋白的相互作用呈現出各種生理活性。由于癌細胞中多胺合成基因ornithine decarboxylase (ODC)的過表達會引起多胺的過量產生,因此多胺有望成為癌癥標記物。但是,由于多胺的結構簡單因而難以分析,僅限于通過HPLC的低通量分析。
另外,分析多胺必須在細胞破裂后進行去除蛋白和其他小分子的前處理,所以可能會因前處理產生偏差。因此,無需前處理便可在活細胞內定量多胺的方法備受期待。
PolyamineRED為理化學研究所 田中主任研究員等所開發的新型多胺檢測試劑,是一款特異性標記細胞內多胺的TAMRA并使其可視化的多胺檢測試劑。

多胺在生物體內合成的路徑
◆特點
● PolyamineRED是一款利用ganansuan炔丙基酯與多胺特異性且快速反應的試劑。可通過在多胺標記TAMRA使細胞內多胺可視化。
● 可用羅丹明濾光片組觀察(激發/發射波長:560 nm/585 nm)。
● 對多胺(腐胺,亞精胺,精胺)顯示高特異性,幾乎不與氨基酸或單胺反應。
● 擁有細胞膜透過性,可用于活細胞的多胺檢測。可通過清洗去除未反應試劑,而多胺-TAMRA復合物因多胺的聚陽離子性保留在細胞內。
● 無需前處理,僅需簡單地操作即可檢測細胞內多胺。
● 可通過細胞內熒光強度半定量多胺總量。*
● 可觀察細胞內多胺的分布情況。
* 由于可檢測出多胺總量,所以無法定量單個多胺種類。

◆應用
● 細胞內多胺的半定量
● 評價多胺在細胞內的分布情況
◆原著論文
K. Vong, K. Tsubokura, Y. Nakao, T. Tanei, S. Noguchi, S. Kitazume, N. Taniguchi, K. Tanaka, Chem. Commun., 53, 8403~8406 (2017)."Cancer cell targeting driven by selective polyamine reactivity with glycine propargyl esters."
◆操作方法概要
1. 添加終濃度10~30 μM的PolyamineRED至新制備的培養基中。
2. 去除培養細胞的培養基,使用PBS清洗兩遍。
3. 添加含有PolyamineRED的培養基。
4. 培養10 min以上。
5. 使用PBS清洗細胞三遍。
6. 甲醛固定后,進行任意染色并觀察。
※甲醇固定可能會導致多胺成分泄漏出細胞外,因此不建議使用甲醇固定。

◆應用實例
癌細胞與非癌細胞的多胺檢測
使用30 μM的PolyamineRED處理3種癌細胞(MCF7,MDA-MB-231,SK-BR-3)與2種非癌細胞(MCF10A,淋巴球)10 min,使用PBS清洗三遍,在DAPI染色后用福爾馬林固定細胞。在癌細胞中觀察到了TAMRA信號。另一方面,由于非癌細胞中的多胺數量較少,因此在MCF10與淋巴球中幾乎檢測不出TAMRA信號。

多胺在細胞內的分布
使用30 μM的PolyamineRED處理MDA-MB-231 10 min后進行DAPI染色并固定細胞。在MDA-MB-231中,細胞核內檢測出的多胺比細胞質多。使用PolyamineRED,可以評價細胞內多胺的分布情況。

參考:gan氨酸炔丙基酯的多胺特異性
使用HPLC追溯gan氨酸炔丙基酯的模型分子(Benzyloxycarbonyl glycine propagyl ester)與多胺(腐胺,亞精胺,精胺),氨基酸以及單胺的反應。
僅與多胺(精胺,亞精胺,腐胺)發生反應,而對單胺(腎上腺素)和氨基酸(賴氨酸)幾乎不反應。由此可知,氨基數越多,對多胺的反應性越高。(引用:原著論文)
物質名稱 | 反應率% |
精胺 | 82% |
亞精胺 | 78% |
腐胺 | 66% |
腎上腺素 | <1% |
賴氨酸 | 2% |
※ 本頁面產品僅供研究用,研究以外不可使用。
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規格 | 產品等級 | 備注 |
| FDV-0020 | PolyamineRED (Intracellular Polyamine Detection Reagent) PolyamineRED(細胞內多胺檢測試劑) | 0.5 mg | - | - |